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準備工作
配制適量的臺盼藍染液,一般使用 0.4% 的臺盼藍溶液,可將 0.4 克臺盼藍粉末溶解于 100 毫升磷酸緩沖鹽溶液(PBS)中,過濾除菌后備用。
準備好細胞懸液,確保細胞懸液濃度適中,若細胞濃度過高,需進行適當稀釋。
染色
取適量細胞懸液(如 100 微升),加入等體積的臺盼藍染液(100 微升),輕輕吹打混勻,使細胞與染液充分接觸,室溫下染色 3 - 5 分鐘。
觀察與計數
取少量染色后的細胞懸液,滴加到血細胞計數板上,蓋上蓋玻片。
在顯微鏡下觀察,活細胞由于細胞膜具有完整性,能夠排斥臺盼藍,因此不著色,呈現透明狀;而死細胞的細胞膜失去完整性,臺盼藍可進入細胞內,使細胞染成藍色。
選擇計數板上合適的區域進行細胞計數,一般選取四個角的大方格和中央的大方格進行計數。分別記錄活細胞(無色)和死細胞(藍色)的數量。
計算細胞活性
根據以下公式計算細胞活性:細胞活性(%)=(活細胞數 / 細胞總數)×100%。例如,計數得到活細胞數為 400 個,死細胞數為 100 個,則細胞總數為 500 個,細胞活性 =(400/500)×100% = 80%。
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